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CRISPR系統(tǒng)的實際應用,PCR Clean™助力科研

更新時間:2023-09-23  |  點擊率:509

CRISPR是一種常見的基因編輯技術(shù)。此類操作對實驗室中,核酸污染的控制有比較高的要求。德國MB公司生產(chǎn)的PCR Clean™,即用型核酸污染祛除噴霧,可直接噴灑在待清潔物品表面,風干即可,便捷高效地清除DNARNA, 以及DNA酶、RNA酶等核酸污染。

 

CRISPR系統(tǒng)在生物學相關的許多領域,都有應用。近日,發(fā)表在《Nature》上,標題為:“CD300ld on neutrophils is required for tumour-driven immune suppression"的文章,在腫瘤小鼠模型中進行了體內(nèi)CRISPR-Cas9篩選,并確定CD300ld是腫瘤有利受體的關鍵候選。

 

免疫檢查點阻斷在腫瘤治療中取得了相當大的成功。然而,很大一部分患者對這些治療只有很小的反應,甚至沒有反應。以骨髓細胞含量高為特征的免疫抑制腫瘤微環(huán)境(TME)是有效免疫治療的主要障礙。

 

中性粒細胞是一種數(shù)量豐富且種類繁多的髓樣細胞,提供先天防御急性感染或炎癥。在癌癥和其他病理性慢性炎癥的情況下,異常的粒細胞生成顯著增加骨髓中中性粒細胞的釋放。這些中性粒細胞在功能上受到干擾,特別是在晚期癌癥中,表現(xiàn)出高度的可塑性,并促進了腫瘤發(fā)生的直接和間接機制。這種病理活化的中性粒細胞表現(xiàn)出強大的免疫抑制活性,在功能上被命名為PMN-MDSCs或粒細胞髓源性抑制細胞(g-MDSCs),在小鼠和人類腫瘤發(fā)生中成為TME的關鍵組成部分。

 

多種中性粒細胞發(fā)育狀態(tài)在腫瘤中共存。PMN-MDSCs和經(jīng)典中性粒細胞具有相同的髓系起源和表面標記,然而,它們在功能上是不同的,并且很少有原型遺傳和表型標記來區(qū)分它們。在腫瘤環(huán)境中,大多數(shù)中性粒細胞被證明是具有免疫抑制活性的PMN-MDSCs。PMN-MDSCs在大多數(shù)類型的癌癥中擴增,促進腫瘤進展并導致對免疫治療的不良反應。需要鑒定參與PMN-MDSCs募集和功能的關鍵分子,以選擇性地靶向PMN-MDSCs進行腫瘤治療。

 

在這項研究中,科研人員通過表征細胞表面蛋白,確定CD300ldPMN-MDSCs中存在的關鍵免疫抑制因子,為癌癥免疫治療提供了克服TME免疫抑制的潛在靶點。

 

總結(jié):

科研人員通過在腫瘤小鼠模型中進行了體內(nèi)CRISPR-Cas9篩選,確定CD300ld是腫瘤有利受體的候選。CD300ld在正常中性粒細胞中特異性表達,在PMN-MDSCs中發(fā)生腫瘤后表達上調(diào)。CD300ld敲除以pmn - mdsc依賴的方式抑制多種腫瘤類型的發(fā)展。CD300ldPMN-MDSCs募集進入腫瘤及其抑制T細胞激活功能所必需的。CD300ld通過STAT3-S100A8/A9軸起作用,敲除CD300ld逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫抑制微環(huán)境。CD300ld在人類癌癥中表達上調(diào),并與患者生存表現(xiàn)出不利的相關性。阻斷CD300ld活性可抑制腫瘤發(fā)展,并與抗pd1具有協(xié)同作用。我們的研究發(fā)現(xiàn)CD300ldPMN-MDSCs中一個關鍵的免疫抑制因子,是腫瘤免疫抵抗所必需的,并為癌癥免疫治療提供了一個潛在的靶點。

 

 


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